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慶大霉素產生菌原生質體融合高產株與發酵罐試產的研究

        因為原生質體具有細胞壁再生能力,又保持細胞全能性,可按一般細胞誘變方式進行誘變;其次因為原生質體是單個的分散細胞,與誘變劑接觸面大。同時誘變后易于形成單菌落,便于分離篩選。采用原生質體融合手段對小單袍菌進行育種、盡管前人已做過許多工作。但所得菌株真正擴大到發酵罐進行穩定生產的尚未見報道。

        本文采用硫酸二乙酯(DES)和紫外線(UV)照射分別對原生質體誘變,誘變后進行融合。硫酸二乙醋(DES)是烷化劑。其對DNA分子的堿基和磷酸部分進行烷化。作用位點往往在鳥嚓嶺上。鳥嘌呤被烷化后,易離子化。由酮式變為不穩定的烯醇式,結果發生G:C  A:T轉換為G:C  C:C或G:C  T:A而導致突變。紫外線(UV)被UNA分子吸收后引起突變的原因可能是DNA與蛋白質交聯;可能是胞嘧啶與尿嘧啶之間的水合作用;也可能是DNA鏈斷裂,有的形成嘧啶二聚體。形成嘧啶二聚體是產生突變的主要原因,嘧啶聚體不僅可以由單鏈上相鄰的兩個胸腺嘧啶之間反應后形成,也可以產生于雙鏈相應的兩個胸腺嘧啶之間。

        本實驗進行原生質體分別誘變、融合、抗性篩選、再生后得到的2株絳紅色小單孢菌融合再生株,經搖瓶連續10批次發酵考查。平均發酵單位在2200U/mI又經5L發酵罐連續發酵考查7批次。取得產量平均1900U/m I的好效果;分析其原因可能是用物理化學方法對原生質體進行誘變處理,其對DNA突變的作用位點和機理不同,兩種誘變方法處理融合后,令細胞的遺傳物質變化較大或互補,同時采用了直接抗性篩選。直接抗性篩選鞏固、穩定了突變位點、幾種因素疊加在一起使變異產生了協同作用,并獲得隱定遺傳。篩選到5l發酵罐穩產高產的菌株。


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